消毒处理后、无菌检查前和操作过程中,必须检查空气中的菌落数,以判断无菌室是否达到规定的洁净度。通常有沉淀细菌和浮游细菌的测定方法。
(1)沉降菌检测方法和标准:
将三块营养琼脂板无菌带入无菌手术室,在手术区桌面左、中、右各放一块;打开平板盖,暴露在空气中30分钟,盖上盖子,分别在36和1放置48h,取出检查,三个平板上生长的菌落数平均不到一个。
(2)浮游细菌的检测方法和标准:
一般采用特殊采样器,最好是冲击采样器,并配有流量计和计时器。取样器和培养皿严格按照仪器手册的要求操作,并定期检查。进入被测室前,采样器和培养皿在消毒室用消毒剂消毒。所用培养基为营养琼脂培养基或药典认可的其他培养基。使用时,启动真空泵抽气至少5min,调整流量,转盘和转速。关闭真空泵,放入培养皿中,盖上采样器,调整间隙高度。在采样口设置好采样点后,依次打开采样器和真空泵,打开定时器,根据采样量设置采样时间。
全部取样后,将培养皿在36和1放置48小时,取出检验,平均漂浮菌落数不超过5个/m3。应为每批培养基选择三个培养皿作为对照培养物。
无菌台面或洁净工作台上的悬浮颗粒也应定期检测,达到100级(一般使用尘粒计数器),根据无菌情况,必要时应更换过滤器。
定期重新验证清洁度:
定期(每季度、每半年、每年)或无菌室设施发生重大变化时,应按国家标准GB/T16292-16294-1996 《医药工业无菌室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》重新验证洁净度,确保洁净度符合要求。原始验证记录应定期保存和归档,验证结果应记录在无菌室的使用登记簿上,作为实验环境的原始依据和趋势分析数据。定期分析和评价无菌室环境检测数据的趋势,并根据评价结果,了解无菌室设施环境质量的稳定性和变化趋势,决定是否有必要修订相应的警示和纠正限值。
定期更换新的紫外灯和净化系统的初、中、高效头;
定期更换新的UV灯(至少一年一次),确保UV灯持续有效的杀菌。同时,在使用登记簿上做好更换记录,并定期归档。至少每两年一次,或根据无菌室核实的实际情况,定期更换初效、中效、高效的头部。确保净化系统功能的持续有效,同时在使用登记簿中做好更换记录,并定期存档。